Micromass cultures are effective for differentiation of human amniotic fluid stem cells into chondrocytes

OBJECTIVES: Articular cartilage is vulnerable to injuries and undergoes an irreversible degenerative process. The use of amniotic fluid mesenchymal stromal stem cells for the reconstruction of articular cartilage is a promising therapeutic alternative. The aim of this study was to investigate the chondrogenic potential of amniotic fluid mesenchymal stromal stem cells from human amniotic fluid from second trimester pregnant women in a micromass system (high-density cell culture) with TGF-β3 for 21 days. METHODS: Micromass was performed using amniotic fluid mesenchymal stromal stem cells previously cultured in a monolayer. Chondrocytes from adult human normal cartilage were used as controls. After 21 days, chondrogenic potential was determined by measuring the expression of genes, such as SOX-9, type II collagen and aggrecan, in newly differentiated cells by real-time PCR (qRT-PCR). The production of type II collagen protein was observed by western blotting. Immunohistochemistry analysis was also performed to detect collagen type II and aggrecan. This study was approved by the local ethics committee. RESULTS: SOX-9, aggrecan and type II collagen were expressed in newly differentiated chondrocytes. The expression of SOX-9 was significantly higher in newly differentiated chondrocytes than in adult cartilage. Collagen type II protein was also detected. CONCLUSION: We demonstrate that stem cells from human amniotic fluid are a suitable source for chondrogenesis when cultured in a micromass system. amniotic fluid mesenchymal stromal stem cells are an extremely viable source for clinical applications, and our results suggest the possibility of using human amniotic fluid as a source of mesenchymal stem cells.

Reference Ranges for Ultrasonographic Measurements of the Uterine Cervix in Low-Risk Pregnant Women / Valores de referência das medidas ultrassonográficas do colo uterino em gestantes de baixo risco

Abstract Objective To define transvaginal ultrasound reference ranges for uterine cervix measurements according to gestational age (GA) in low-risk pregnancies. Methods Cohort of low-risk pregnantwomen undergoing transvaginal ultrasound exams every 4 weeks, comprisingmeasurements of the cervical length and volume, the transverse and anteroposterior diameters of the cervix, and distance fromthe entrance of the uterine artery into the cervix until the internal os. The inter- and intraobserver variabilities were assessed with the linear correlation coefficient and the Student t-test. Within each period of GA, 2.5, 10, 50, 90 and 97.5 percentiles were estimated, and the variation by GA was assessed with analysis of variance for dependent samples. Mean values and Student t-test were used to compare the values stratified by control variables. Results After confirming the high reproducibility of the method, 172 women followed in this cohort presented a reduction in cervical length, with an increase in volume and in the anteroposterior and transverse diameters during pregnancy. Smaller cervical lengths were associated with younger age, lower parity, and absence of previous cesarean section (C-section). Conclusion In the studied population, we observed cervical length shortening throughout pregnancy, suggesting a physiological reduction mainly in the vaginal portion of the cervix. In order to better predict pretermbirth, cervical insufficiency and premature rupture of membranes, reference curves and specific cut-off values need to be validated.

Resumo Objetivo Elaborar curvas de referências de medidas ultrassonográficas de colo uterino por idade gestacional (IG) em gestações de baixo risco. Métodos Coorte de gestantes de baixo risco, submetidas a ultrassom transvaginal repetido a cada 4 semanas, com medida do comprimento, dos diâmetros anteroposterior e transverso, da distância entre a entrada da artéria uterina no colo e o orifício interno, e do volume do colo. Foi avaliada a variabilidade inter e intraobservador entre as medidas com o coeficiente de correlação linear e teste t de Student. Para cada faixa de IG, estimaram-se os percentis 2,5, 10, 50, 90 e 97,5 dos valores das medidas, com a variação por IG avaliada por análise de variância para amostras dependentes. As comparações dos valores por variáveis de controle foram feitas por meio dos cálculos de médias e teste t de Student. Resultados Assegurada a alta reprodutibilidade do método, as 172 mulheres acompanhadas na coorte apresentaram redução das medidas de comprimento de colo com o decorrer da gestação, com aumento de volume e dos diâmetros anteroposterior e transverso. O menor comprimento cervical foi associado à menor idade materna, menor paridade, e ausência de cesárea prévia. Conclusão Na população estudada foi observada redução no comprimento cervical com o decorrer da gestação, sugerindo encurtamento fisiológico principalmente à custa da porção vaginal do colo. Há a necessidade de validar tais curvas de referência e pontos de corte específicos para uma melhor predição de risco de parto pré-termo, insuficiência cervical, e amniorrexe prematura.

Desempenho da ultra-sonografia na detecção das metástases em linfonodos axilares em mulheres com câncer de mama / Performance of ultrasound in the detection of axillary lymph node metastases in breast cancer patients

OBJETIVOS: avaliar o desempenho de diversas características ultra-sonográficas morfológicas (12) e doplervelocimétricas (7), para detecção de metástases linfonodais em mulheres com câncer de mama. MÉTODOS: foram incluídas 179 mulheres (181 axilas), entre janeiro e dezembro de 2004. Os exames ultra-sonográficos foram realizados com transdutor linear em tempo real (Toshiba-Power Vision-6000 (modelo SSA-370A)). Para o estudo de parâmetros morfológicos foram utilizadas freqüências entre 7,5 e 12 MHz. Para os parâmetros Doppler foi utilizada freqüência de 5 MHz. Subsequentemente, as pacientes foram submetidas a axilectomia dos níveis I, II e III (158) ou à técnica do linfonodo sentinela (23). Foram calculadas a sensibilidade, a especificidade e os valores preditivos positivo e negativo para cada parâmetro. Para a associação de parâmetros foi utilizada a árvore de decisão. Foram estabelecidos os valores de corte para as variáveis contínuas por meio da curva ROC. RESULTADOS: ao exame ultra-sonográfico foi identificado pelo menos um linfonodo axilar em 173 (96 por cento) exames. O exame histológico detectou metástase linfonodal em 87 mulheres (48 por cento). As melhores sensibilidades dos critérios morfológicos foram encontradas com o volume (62 por cento), diâmetro ântero-posterior (62 por cento) e local do centro ecogênico (56 por cento). Embora a especificidade da invasão da gordura adjacente (100 por cento), regularidade das margens (92 por cento) e da ecotextura do parênquima (99 por cento) tenham sido elevadas, a sensibilidade destes parâmetros foi muito baixa. Nenhum critério dopplervelocimétrico alcançou 50 por cento de sensibilidade. A árvore de decisão selecionou a localização do centro ecogênico, a ecotextura do parênquima e a regularidade das margens como melhor associação de parâmetros. CONCLUSAO: o estadiamento dos linfonodos axilares por método não invasivo ainda é um objetivo não alcançado no tratamento das pacientes com câncer de mama

Diagnóstico do oligoâmnio pela ultra-sonografia: uso de diferentes medidas do maior bolsão comparadas ao ILA / Diagnostic capacity of oligohydramnios by ultrasound using different measures os the maximum pool depth of amniotic fluid in comparison to AFI

Objetivo: comparar a capacidade de diagnosticar oligoâmnio pela ultra-sonografa por meio de diferentes valores do maior bolsão de Iíquido amniótico, em comparação ao índice de líquido amniótico (ILA), em gestantes normais, de 36 a 42 semanas de gestação. Métodos: realizou-se um estudo descritivo de validação de método diagnóstico, incluindo 875 gestantes normais. Mediante um exame ultra-sonográfico obstétrico de rotina, foi feita a medida do maior boIsão de líquido amnitico para o diagnóstico de oligoâmnio, utilizando como padrão-ouro o índice de líquido amniótico. Os dados foram analisados por meio do cálculo da sensibilidade e da especificidade da medida do maior bolsão de líquido amniótico, utilizando os diferentes pontos de corte de 10, 20 a 30 mm, em comparação aos valores normais do índice de líquido amniótico determinados peIos percentis 2,5 e 10 nas respectivas idades gestacionais. Resultados: a medida do maior bolsão de Iíquido amniótico apresenta baixa sensibilidade para diagnosticar oligoâmnio quando se adotam os pontos de corte 10 e 20 mm, a boa sensibilidade e especificidade quando se adota 30 mm, quando comparadas as medidas do índice de líquido amniótico nos percentis 2,5 e 10 da curva normal. A sensibilidade e especificidade da medida do maior bolsão são melhores, quando se adota o ponto de corte de 30 mm para diagnosticar oligoâmnio em comparação ao percentil 2,5. Conclusões: a capacidade de diagnosticar oligoâmnio pela medida do maior bolsão é satisfatória apenas com o ponto de corte em 30 mm

Evoluçäo das características ecográficas da placenta, da posiçäo e da apresentaçäo fetal em gestações normais / Evolution of ultrasound characteristics of placenta and fetal position and presentation in normal pregnancies

Objetivo: avaliar as características ecográficas da gestaçäo normal, segundo o grau, a localizaçäo e a espessura placentária, a apresentaçäo e a posiçäo fetal ao longo da segunda metade da gestaçäo. Métodos: estudo descritivo, incluindo no minimo 120 medidas em cada idade gestacional, de 2.868 gestantes normais da cidade de Campinas, por meio de exame ultra-sonográfico de rotina, considerando-se os critérios de Grannum, Berkowitz, Hobbins (1979) para a classficaçäo do grau placentário e a medida da espessura placentária no local da inserçäo do cordäo umbilical. Resultados: a placenta grau 0 foi mais comum até 31 semanas, o grau I apresentou maior, freqüência após a 32ª semana e o grau II näo foi observado antes da 32ª semana. A placenta grau III foi mais freqüente a partir da 36ª semana. A espessura placentária aumentou significativamente com a gestaçäo. As localizações mais freqüentes foram a anterior e a posterior. A apresentaçäo cefálica foi a mais freqüente em todas as idades gestacionais, com apenas 1 por cento de apresentações pélvicas ao termo. A posiçäo fetal mais freqüente foi a de dorso lateral esquerda, seguida da de dorso lateral direita. Conclusões: os fatores estudados tiveram distribuiçäo similar à esperada para populações normais e podem servir como um padräo para a populaçäo brasileira